Объекты и методы исследования

Учебные материалы по биологии / Эколого-физиологические особенности доминирующей водоросли литоральной зоны озера Байкал / Объекты и методы исследования

Страница 1

Сбор полевого материала.

Сбор макроводорослей на глубине от 0 до 1,5-3 м осуществляли с использованием щипцов Рубцова. С помощью скальпеля отделяли водорослей от камней. Пробу промывали через капроновое сито, переносили в емкость для хранения и фиксировали раствором формалина до 4% конечной концентрации [45].

Для подготовки материала к проведению молекулярно-биологического анализа пробы отбирали в бухте Большие Коты, заливе Листвяничный, проливе Малое море, на острове Большой Ушканий, о-ве Ольхон. Образцы фиксировали спиртом (96%), а также после удаления излишков воды помещали в полипропиленовые пробирки типа эппендорфа объемом 1,5 мл с силикагелем.

В работе используются данные изменений химического состава воды в прибрежье озера, предоставленные д.г.н., с.н.с. В.М. Домышевой и к.б.н. М. В. Сакирко, а также - неопубликованные данные о динамике биомассы микроводорослей в толще водыд.б.н. Н.А. Бондаренко.

Спектрофотометрический анализ пигментов

. В задачи данного исследования входило изучение сезонной динамики фитомассы основной водоросли урезовой зоны оз. Байкал Ulothrix zonata Kütz., содержания пигментов в её клетках и соотношения между этими показателями.

Спектрофотометрический анализ пигментов U. zonata проходил на базе СИФБР СО РАН под руководством д.б.н. С.В. Осиповой. Для изучения концентраций пигментов материал отбирали в период открытой воды в западной части Южного Байкала в зал. Листвяничный и в бух. Большие Коты с июня по октябрь 2011 г. на расстоянии от 0,2 до 4 м от уреза воды с глубин от 0,3 до 0,5 м, во время ледостава - в заливе Листвяничный в феврале и марте 2012 г. под ледяным покровом, окаймляющим берег озера, - заберегом, с помощью щипцов Рубцова. В качестве руководства для отбора проб, их хранении, проведении анализа и обработке результатов использовался стандарт ГОСТ 17.1.4.02-90 «Вода. Методика спектрофотометрического определения хлорофилла а».

Перед проведением анализа предварительно водоросли очищали от загрязнений и промывали дистиллированной водой. Излишки воды удаляли фильтровальной бумагой. Навески гомогенизировали в фарфоровых ступках с добавлением ацетона (90%) и кварцевого песка в течение 15 минут. Светорассеивающую взвесь удаляли из экстракта центрифугированием на аппарате K26D (Германия) с ускорением 8000 оборотов/мин. в течение 15 минут. После центрифугирования экстракт доводили до объема фотометрической кюветы. При спектрофотометрировании использовали кюветы с рабочей длиной 1 см. Отсчеты оптических плотностей брали на шести длинах волн- 430, 480, 664, 647, 630 и 750 нм. Фотометрирование проводили дважды: до и после подкисления экстракта несколькими каплями приготовленного раствора соляной кислоты в ацетоне.

При обработке данных использовались стандартные программные пакеты для персонального компьютера.

Метод получения культур

. Собранный в природе живой материал служил источником получения лабораторной культуры водорослей. Культивирование проводили в Центре коллективного пользования «Пресноводный аквариумный комплекс» (ЦКП ПАК). Для этого использовали аквариальную установку. В аквариум, наполненный байкальской водой, помещали камни с обрастаниями. Температура воды составляла £ 4 ° С. Температура воздуха не превышала 7,5° С. В качестве источника освещения использовали люминесцентные лампы общего назначения. Небольшой фонтан моделировал волновое движение воды в аквариуме.

В условиях экспериментальной лаборатории исследовали морфологические и биологические особенности U. zonata с сентября 2010 года по июнь 2012 г. В ходе эксперимента дважды в неделю при микроскопировании наблюдали состояние культивируемой водоросли, фотографировали и делали замеры клеток.

Материал, полученный в условиях лаборатории, помещали в чашки Петри на северное окно лаборатории. Периодически (по мере подсыхания) в чашки добавляли воду из исходного местообитания и питательную среду Z-8 [133], имеющую активную реакцию (рН), как в исходной среде. Такие смешанные культуры служили источником живого материала.