Практическая часть

Учебные материалы по биологии / Симбиотические взаимодействия микроорганизмов и растений / Практическая часть

Страница 1

В данной работе была использована чернозёмная почва.

Чернозёмы - тип почв, формирующихся под степной и лесостепной растительностью суббореального пояса. Образуются в основном на карбонатных материнских породах - лёссах, лёссовидных глинах и суглинках, иногда на более древних известняках, песчаниках, мергелистых глинах в условиях непромывного или периодически промывного водного режима. Для чернозёмов характерны накопление органических веществ в гумусово-аккумулятивном горизонте, высокое содержание в нём гумуса <http://bse.sci-lib.com/article016968.html>, хорошо выраженная комковато-зернистая структура, высокое потенциальное плодородие.

Чернозёмы сформировались в результате тесного взаимодействия травянистой растительности, климата, рельефа местности, материнской породы и др. факторов почвообразования; следствие этого процесса - накопление гумуса.

Травянистая растительность ежегодно оставляет в почве большое количество опада - растительных остатков, 70-80% которых составляют корни. Гидротермические условия степной и лесостепной зон благоприятствуют процессу гумификации <http://bse.sci-lib.com/article016891.html>, в результате которого образуются сложные гумусовые соединения (в основном гуминовые кислоты) (благодаря микробиологическим процессам), придающие почвенному профилю тёмную окраску.

Методы биологического исследования почвы. Определение влажности почвы

Необходимо определить влажность исследуемой почвы, так как полученные данные анализа при оценке результатов должны быть пересчитаны на 1 г воздушно-сухой почвы.

Берём пустой бюкс и взвешиваем его. Затем помещаем в него 10 г почвы и снова взвешиваем. После сушки бюкса с навеской почвы в сушильном шкафу при 105ºС и достижения постоянной массы, бюкс с навеской почвы взвешивают и определяют влажность по формуле:

% = · 100%, где

-масса бюкса с сырой почвой (50,2)-масса бюкса с сухой почвой (47,9)-масса пустого бюкса (24,7)

А%= ((50,2 - 47,9)/(47,9-24,7)) ∙ 100% = 9,91%

Приготовление почвенной суспензии и посев

Навеску почвы (10 г) переносят в колбу на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды, взбалтывают 10 мин (лучше на механической мешалке) и дают отстояться грубым частицам почвы.

Одновременно со взятием навески для анализа из средней пробы отбирают 10-20 г почвы для определения влажности, так как полученные при анализе данные пересчитывают на 1 г абсолютно сухой почвы.

После того, как почва в колбе с водой отстоялась, начинают готовить разведения: первая колба с суспензией соответствует разведению 10-1, последующие разведения - 10-2,10-3,10-4,10-5.

Из каждого предыдущего разведения отдельной стерильной пипеткой берут 10 мл суспензии и переносят в следующую колбу с 90 мл. Всякий раз пипетку ополаскивают и отставляют. Последующие колбы встряхивают по 1 мин.

Из полученных разведений делают посев на плотные среды.

При определении количества бактерий в почве для посева на МПА, берем разведение 10-5 и 10-4, среде Гетчинсона берем разведение 10-2 и 10-3, на сусло-агаре берем разведение 10-3 и 10-4, на среде Эшби применяют метод обрастания комочков.

Для глубинного посева берут 1 мл почвенной суспензии из разведения на порядок меньшего, чем для поверхностного посева.

Суспензию вносят в стерильную чашку Петри, заливают агаром, расплавленным и охлажденным до 45°С, и смешивают с ним. При глубинном посеве показатели получаются более низкие, чем при поверхностном.

Среды, используемые в данной работе

При определении численности микроорганизмов нами были использованы плотные среды: МПА, сусло-агар, среда Эшби и среда Гетчинсона.