Экспериментальные данные по светорассеянию

Учебные материалы по биологии / Использование дифракционных методов для анализа структуры, фракционного состава и равновесных взаимодействий биологических макромолекул / Экспериментальные данные по светорассеянию

Страница 1

На рис. 4 приведена индикатрисса светорассеяния от стандартного образца в координатах Гинье (ln I(h), h2). Видно, что точки индикатриссы рассеяния хорошо соответствуют линейному графику и высокой монодисперсности частиц латекса. Значение радиуса инерции (Rg = 912 ± 15 А), вычисленное из наклона этого графика оказалось близко к ожидаемому (Rg = 906 А) для данного стандартного образца (частицы стандартизованного латекса - однородные сферы).

Для изучения особенностей взаимодействия различных ПЭГ с белками сывороток крови нами были выбраны ПЭГ с молекулярными массами от 1000 до 20000 Да. Были приготовлены растворы ПЭГ в физрастворе с максимальными концентрациями (с учетом их растворимости). Для удобства экспериментов необходимо было привести все ПЭГ к одной объемной концентрации. Для этого измеряли индикатриссы светорассеяния от каждого из приготовленных исходных растворов ПЭГ. Как и следовало ожидать, для частиц в растворе с молекулярными массами от 1 до 20 кДа индикатриссы светорассеяния практически не отличались от констант (из-за соотношения длины волны света (4300 А) и размера молекул ПЭГ (20-100 А)). Поскольку известно, что , где С, М - концентрация и средняя молекулярная масса рассеивающих частиц, соответственно, то это позволяет определять необходимые коэффициенты разведения [15]. На рис. 5 приведены графические зависимости экспериментальных интенсивностей светорассеяния в нулевой угол (I(0)) до и после приведения их к одной концентрации.

Рис. 4. График Гинье для стандартного образца (Daw Latex, Sigma, полистерин, диаметр частиц 2R = 0,234 мкм). .

Рис. 5. Зависимость интенсивностей светорассеяния в нулевом угле (I(0)) для различных ПЭГ в исходном (черные точки) и приведенном состоянии концентраций (светлые кружочки).

(кроме ПЭГ-20000, у которого предельная концентрация разведения оказалась существенно ниже, чем у других ПЭГ). Таким образом, все концентрации используемых ПЭГ были приведены к концентрации 250 мг/мл, что соответствует примерно 25% объемной и весовой концентрации.

Таблица 1. Результаты титрования объединенной сыворотки ПЭГ-6000. Объем исходного буфера V = 750 мкл (метод светорассеяния)